肿瘤免疫大新闻！血液循环肿瘤细胞（CTCs）中现身新的免疫检查点–HLA-E

　　初绽头角，免疫检查点

　　免疫监视学说认为免疫系统就像一支“作战优良”的部队一般，能够持续地监视体内出现的异常细胞，识别并摧毁它们。同样地，免疫系统可通过癌症免疫周期对抗杀死部分肿瘤细胞。可肿瘤细胞似乎有“免死金牌”一般，总神奇般“死灰复燃”，人们对此很是困惑。直到年，Allison提出免疫检查点，指程序性死亡受体及其配体，存在于免疫系统中，担负着上调或下调免疫系统信号的作用

　　简单来说，凡是可以影响免疫反应的重要靶点，都属于免疫检查点。最家喻户晓的免疫检查点便是年荣获诺贝尔奖的PD-1和CTLA-4，其具有免疫抑制功能，随后肿瘤免疫治疗开始进入广大群众的视野。这不，研究人员又发现了HLA-E这一新的免疫检查点，让我们来一探究竟~

　　新的突破，HLA-E

　　看到下面这张图，是否又重新唤起了你儿时的记忆，NO，NO，NO，这可是CancerCell的期刊封面。近期，医院团队发表题为“ImmunecheckpointHLA-E:CD94-NKG2AmediatesevasionofcirculatingtumorcellsfromNKcellsurveillance”的封面研究论文

　　CancerCell封面（图片来源：CancerCell期刊 　　对于肿瘤细胞与不同类型的免疫细胞之间的免疫检查点分子对及ICBs的研究，大多聚焦于实体肿瘤原发病灶或转移灶中，对CTCs中肿瘤细胞的免疫监视探索很少 　　■移动的"种子"

　　循环肿瘤细胞CTC

　　年，Ashworth首次提出循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcells,CTCs）的概念，目前是指存在于外周血中的各类肿瘤细胞。血液循环是肿瘤从原发病灶向远处器官扩散的主要途径。CTC就像一粒“种子”，通过血液循环，经侵袭、内渗、循环、外渗和定殖5个步骤，最终发展成为恶性肿瘤（图1）。

　　图1.血液传播过程中CTC-血液相互作用示意图

　　■发现及验证

　　CTC中新的免疫检查点分子对HLA-E:CD94-NKG2A

　　为研究CTCs的相关转移机制，采集了胰腺导管腺癌患者的原发性肿瘤、肝转移灶以及肝门静脉（hepaticportalvein,HPV）中的血液进行活检，并利用单细胞测序技术（scRNA-seq）等技术，分析其转录组学特征和基因表达差异（图2A）。结果显示，血液循环中观察到CTCs和NK细胞之间存在主要相互作用，其中HLA-E和CD94-NKG2在CTC和NK细胞之间具有最强烈的免疫相互作用（图2B）。

　　进一步的研究发现，大多数NK细胞都含有这种免疫抑制受体NKG2A，且CTC中HLA-E的表达水平高于实体病变肿瘤细胞中的表达水平（图2C-E）。因此，血液中NKG2A和HLA-E之间上调的相互作用可能是由HLA-E分子水平的增加驱动的。

　　图2.HLA-E:CD94-NKG2A免疫检查点分子对的发现

　　A:机制研究方案；B:不同来源肿瘤细胞与NK细胞间的免疫检查点分子对；C-E:HLA-E在不同来源肿瘤细胞上的表达。

　　随后，为验证CTC中HLA-E的免疫检查点功能，在体外进行了NK细胞毒性实验，在体内构建尾静脉小鼠模型来模拟CTC介导的转移，通过使用特异性抗体Monalizumab阻断NKG2A或敲低HLA-E来中断免疫检查点。体内外分析表明，CTC和NK细胞通过免疫检查点分子对HLA-E:CD94-NKG2A相互作用。通过阻断NKG2A或敲低HLA-E表达来破坏这种相互作用可增强NK介导的体外肿瘤细胞杀伤作用，并防止体内肿瘤转移（图3）。

　　图3.HLA-E:CD94-NKG2A的体内外功能验证

　　A:体外细胞毒性实验；B:体内尾静脉模型中肺转移情况。

　　■机制探究

　　CTC通过参与血小板来源的RGS18上调免疫检查点分子HLA-E

　　那么CTCs是如何动员HLA-E的呢？研究人员评估了可能与HLA-E表达水平呈正相关的差异表达基因。观察到RGS18并非在原发和转移病灶的肿瘤细胞中表达，而是几乎只在CTC中表达。众所周知，CTC通常被血小板覆盖，而血小板是RGS18蛋白的主要来源。机制研究表明，血小板源性RGS18通过AKT-GSK3b-CREB信号通路促进HLA-E的表达，RGS18过表达促进胰腺肿瘤肝转移（图4）。

　　图4.CTC通过HLA-E:CD94-NKG2A逃避NK细胞的监视

　　机制探讨：

　　1.当向血管内灌注CTC时，CTC会粘附并摄取携带RGS18的血小板。2.RGS18抑制宿主细胞中p-AKT的活化，进而抑制GSK3βSer9的磷酸化而稳定GSK3β蛋白。

　　3.GSK3β蛋白通过CREB1的Ser位点磷酸化促进CREB1的核转位。

　　4.CREB1与细胞核内HLA-E基因启动子区SXY位点结合，上调CTC表面HLA-E表达和易位。

　　5.NK细胞表面HLA-E与NK细胞表面的CD94-NKG2A相互作用，激活细胞内的磷酸酶SHP1，抑制NK细胞的杀伤活性。

　　免疫检查点阻断（ICB），大放光彩

　　说了这么多，免疫检查点这一“香饽饽”究竟有何用处呢？言至于此，便不得不提免疫检查点阻断（Immunecheckpointblockade,ICB）疗法，指的是基于程序性死亡受体及其配体的免疫检查点的阻断疗法，通过抑制二者的结合，释放免疫抑制调节，恢复T淋巴细胞的肿瘤特异性细胞毒性，从而提高宿主免疫系统对肿瘤细胞的攻击性[7,8]。ICB已经为多种类型癌症的治疗带来了翻天覆地的变化，在过去的这些年，针对PD-1和CTLA-4，FDA已批准了9种阻断免疫检查点的单克隆抗体药物，包括7个PD-1/PD-L1，2个CTLA-4单抗，用于20多种适应症，包括转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、肝细胞癌等

　　近年，一些新的免疫检查点分子包括TIM-3、VISTA和LAG-3等也被引入研究。例如，许多临床试验（如NCT）评估了不同的阻断LAG-3的方法联合抗PD-1治疗作为潜在的新型ICBs，经过不懈努力，最终Relatlimab于年3月首次获得美国FDA批准治疗黑色素瘤，成为首款获批上市的抗LAG-3抑制剂。

　　大家进一步了解了肿瘤免疫中“响当当”的免疫检查点，并详细介绍了新的免疫检查点--HLA-E及其相应机制。其次，基于免疫检查的阻断疗法给肿瘤免疫之路带来的曙光，针对经典免疫检查点的药物已获批上市，多种新型免疫检查点百花齐放，共同对抗肿瘤这个“大魔头”。